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毒素类试剂盒


黄曲霉毒素总量(AFT)ELISA检测试剂盒

黄曲霉毒素总量(AFT)ELISA检测试剂盒

黄曲霉毒素是一类真菌(如黄曲霉和寄生曲霉)的有毒的代谢产物,它们具备很强的致癌性,首要存在于谷物、坚果、棉子和一些和人类血液,植物饲料相干的产物中。薄层色谱一向是检测黄曲霉毒平素用的体例,可是此体例制备样品及阐发样品时费时又吃力。而操纵黄曲霉毒素总量ELISA试剂盒则可以或许疾速而精确的阐发样品中黄曲霉毒素残留。

黄曲霉毒素总量(AFT)ELISA检测试剂盒是操纵ELISA手艺研发的新一代真菌毒素检测产物,操纵时候35~40min,能最大限制地削减操纵偏差和任务强度。


【产物先容】

黄曲霉毒素是一类真菌(如黄曲霉和寄生曲霉)的有毒的代谢产物,它们具备很强的致癌性,首要存在于谷物、坚果、棉子和一些和人类血液,植物饲料相干的产物中。薄层色谱一向是检测黄曲霉毒平素用的体例,可是此体例制备样品及阐发样品时费时又吃力。而操纵黄曲霉毒素总量ELISA试剂盒则可以或许疾速而精确的阐发样品中黄曲霉毒素残留。

黄曲霉毒素总量(AFT)ELISA检测试剂盒是操纵ELISA手艺研发的新一代真菌毒素检测产物,操纵时候35~40min,能最大限制地削减操纵偏差和任务强度。

【实验道理】

黄曲霉毒素总量(AFT)ELISA检测试剂盒接纳间接合作ELISA体例,在酶标板微孔条上预包被黄曲霉毒素抗原,样本中黄曲霉毒素和此抗原合作黄曲霉毒素的抗体,酶标二抗催化TMB底物显色,样本吸光值与其含有的黄曲霉毒素成负相干,与规范曲线比拟再乘以其对应的稀释倍数,便可得出样品中黄曲霉毒素的含量。

【合用规模】

黄曲霉毒素总量(AFT)ELISA检测试剂盒可定性、定量检测玉米、花生、饲料、食用油等样本中的黄曲霉毒素。

【穿插反映率】

黄曲霉毒素B2……………………………………………100%

黄曲霉毒素B1…………………………………………97%

黄曲霉毒素G1…………………………………………98%

黄曲霉毒素G2…………………………………………101%

【操纵单元需自备的装备及试剂】

装备:

┅┅微孔板酶标仪450nm/630nm

┅┅振荡器

┅┅涡旋仪

┅┅离心计心情

┅┅天平:感量0.01g

┅┅刻度移液管:10ml

┅┅洗耳球

┅┅漏斗

┅┅分液漏斗

┅┅烧杯:50ml

┅┅聚苯乙烯离心管:10ml、50ml

┅┅微量移液器:单道 20l~200l、200l~1000l

多道 250l

┅┅滤纸

试剂:

┅┅甲醇

----去离子水

----煤油醚(或正己烷)

【供给的资料与试剂】

组份称号 96T装量 48T装量 备注

酶标板 96T 48T 别的各规格装量按比例增添或削减,详细装量以什物为准。

规范品×6瓶* 1ml/瓶 0.5ml/瓶

AFT酶标物 9ml 5ml

AFT抗试剂 6ml 3ml

底物液A液 9ml 5ml

底物液B液 9ml 5ml

停止液 6ml 3ml

稀释洗濯液(10×) 40ml 20ml

*注:规范品浓度为0ppb, 0.1ppb, 0.3ppb, 0.9ppb, 2.7ppb, 8.1ppb

【溶液的配制】

配液1: 洗濯任务液

用去离子水将稀释洗濯液(10×)按1:9体积比停止稀释,即1份稀释洗濯液加9份去离子水,用于酶标板的洗濯,洗濯任务液在4℃环境可保管一个月。

配液2: 样品提取液1

用去离子水将甲醇按3:2体积比停止稀释,即3份甲醇加2份去离子水,用于提取样本中的黄曲霉毒素。

配液3: 样品提取液2

用去离子水将甲醇按7:3体积比停止稀释,即7份甲醇加3份去离子水,用于提取样本中的黄曲霉毒素。

【样本前处置步骤】

(一)花生处置体例

┅┅取10g破坏样品,插手30ml样品提取液1;

┅┅猛烈振荡5min;

┅┅3500r/min离心5min,或用通俗滤纸过滤;

┅┅用去离子水按1:5比例稀释(1份滤液+5份去离子水);

┅┅取稀释后液体待测。

稀释倍数:18

(二)饲料、玉米处置体例

┅┅取3g破坏样品,插手15mL样品提取液2;

┅┅猛烈振荡10min;

┅┅3500r/min离心5min,或用通俗滤纸过滤;

┅┅上清液或滤液用去离子水按1:6比例稀释(1份滤液+6份去离子水);

┅┅取稀释后液体待测。

稀释倍数:35

(三)食用油处置体例

┅┅取5g食用油样品于小烧杯中;

┅┅用10mL煤油醚(或是正己烷)分次将试样转移至125mL分液漏斗中;

┅┅精确插手15mL 样品提取液1,加塞振荡5分钟,静置分层,放出基层甲醇水提取液;

┅┅用去离子水按1:5比例稀释(1份滤液+5份去离子水);

┅┅取稀释后液体待测。

稀释倍数:18

【检测步骤】

测定前应须知:

1、操纵之前将一切试剂和需用板条的温度上升至室温(20~25℃)。

2、操纵以后立行将一切试剂放回2~8℃。

3、在ELISA阐发中的再现性,很大水平上取决于洗板的分歧性,精确的洗板操纵是ELISA测定法式中的要点。

4、在一切恒温孵育进程中,防止光芒照耀,用盖板膜封住微孔板。

5、黄曲霉毒素可致癌,应戴手套操纵。

操纵步骤:

1、将所需试剂从冷藏环境中掏出,置于室温(20~25℃)均衡30min以上,注重每种液体试剂操纵前均须摇匀。

2、掏出须要数目的微孔板,将不必的微孔板放进原锡箔袋中并且与供给的枯燥剂一路从头密封,保管于2~8℃。不要冷冻。

3、洗濯任务液在操纵前也需回温。

4、编号:将样本和规范品对应微孔顺次编号,每一个样本和规范品做2孔平行,并记实规范孔和样本孔地点的地位。

5、加规范品/样本:加规范品/样本30l到对应的微孔中,再插手黄曲霉毒素总量酶标物70l/孔,最初插手黄曲霉毒素总量抗试剂50l/孔。悄悄振荡混匀,用盖板膜盖板后置室温避光环境中反映30min。

6、洗板:谨慎揭开盖板膜,将孔内液体甩干,用洗濯任务液300l/孔,充实洗濯5次,每次距离30s,用吸水纸拍干(拍干后未被断根的气泡可用未操纵过的枪头戳破)。

7、显色:插手底物液A液75l/孔,再加底物液B液75l/孔,悄悄振荡混匀,用盖板膜盖板后置室温避光环境反映15min~20min。

8、测定:插手停止液50l/孔,悄悄振荡混匀,设定酶标仪于450nm处(倡议用双波长450/630nm检测,请在5min内读完数据),测定每孔OD值。(若无酶标仪,则不加停止用目测法可停止鉴定)。

【成果鉴定】

成果鉴定有两种体例,大略鉴定可用第1种体例,而定量鉴定用第2种体例。注重样本吸光值与其所含黄曲霉毒素成负相干。

1、用样本的均匀吸光度值与规范值比拟便可得出其浓度规模(ppb)。假定样本1的吸光度值为0.659,样本2的吸光度值为1.525,规范液吸光度值别离是:0ppb为2.101;0.1ppb为1.738;0.3ppb为1.313;0.9ppb为0.831;2.7ppb为0.469;8.1ppb为0.262。则样本1的浓度规模是0.9ppb~2.7ppb;样本2的浓度规模是0.1ppb~0.3ppb 再乘以其对应的稀释倍数便可得出样本中黄曲霉毒素的浓度规模。

2、定量阐发

(1)百分吸光率的计较,规范品或样本的百分吸光率即是规范品或样本的百分吸光度值的均匀值(双孔)除以第一个规范(0规范)的吸光度值,再乘以100%,即

百分吸光度值(%)= B ×100%/B0

B—规范溶液或样本溶液的均匀吸光度值

B0—0(ppb)规范溶液的均匀吸光度值

(2)规范曲线的绘制与计较

以规范品百分吸光率为纵坐标,以黄曲霉毒素规范品浓度(ppb)的半对数为横坐标,绘制规范曲线图。将样本的百分吸光率代入规范曲线中,从规范曲线上读出样本所对应的浓度,乘以其对应的稀释倍数即为样本中黄曲霉毒素现实量。

若操纵试剂盒专业阐发软件停止计较,更便于大批样本的精确、疾速阐发。(接待来电讨取)

【检测体例活络度、精确度、紧密度】

试剂盒活络度:0.1ppb

收受接管率:

花生:95±15%

饲料:85±15%

玉米:90±15%

食用油:95±15%

紧密度:

试剂盒的变异系数均小于10%

【注重事变】

1、室温低于20℃或试剂及样本不回到室温(20~25℃)会致使一切规范的OD值偏低。

2、在洗板进程中若是呈现板孔枯燥的环境,则会呈现规范曲线不成线性,反复性不好的景象。以是洗板拍干后该当即停止下一步操纵。

3、每加一种试剂前需将其摇匀。

4、反映停止液为2M硫酸,防止打仗皮肤。

5、不要操纵过了有用日期的试剂盒;也不要操纵过了有用期的试剂盒中的任何试剂,搀杂操纵过了有用期的试剂盒会引发活络度的下降;不要互换操纵差别批号试剂盒中的试剂。

6、贮存前提

保管试剂盒于2~8℃,不要冷冻,将不必的酶标板微孔板放进自封袋从头密封。规范物资和无色的发色剂对光敏感,是以要防止间接裸露在光芒下。

7、试剂蜕变的迹象

发色试剂有任何色彩标明发色剂蜕变,该当弃之。0规范的吸光度(450/630nm)值小于0.5(A450nm<0.5)时,表现试剂能够蜕变。

8、在插手底物液A液和底物液B液后,普通显色时候为15~20min便可。若色彩较浅,可耽误反映时候到30min(或更长),但不得跨越30min。反之,则减短反映时候。

9、稀释洗濯液若有结晶属一般景象,请加热消融后操纵。

10、该试剂盒最好反映温度为25℃,温渡过高或太低将致使检测吸光度值和活络度产生变更。



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